【环球聚看点】可见分光光度计操作规程_可见分光光度计

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1、分光光度计是一种分光光度法测量的分析仪器。

2、定义: 分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术. 特点: 灵敏,精确,快速和简便,在复杂组分系统中,不需要分离,即能检测出其中所含的极少量物质. 应用: 生物<>化学研究中广泛使用的方法之一,广泛用于糖,蛋白质,核酸,酶等的快速定量检测. 物质的吸收光谱：当光线通过某种物质的溶液时,透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液. 入射光 = 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光 如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失,则: 入射光 = 吸收光 十 透过光 物质吸光度(A)与透射比(T)的关系 设 I0 为经过空白校正后入射光的强度;I 为透过光的强度. 根据实验得知 I = I0 ?10-εc l 式中,c 表示吸收物质的摩尔浓度;l 表示吸收物质的光径,用cm表示;ε表示吸收物质的摩尔消光系数,它表示物质对光的吸收特性,不同物质的ε数值不同. 所以 I / I0 = 10-εc l 令 T(透射比) = I / I 0 T = 10-εcl 若以T对吸收物质的浓度作图,则得图1-5-2中的曲线. 由上式可得 1g(1 / T) = εc l lg(l / T)为物质的吸光度(A) A = 1g(1 / T) Lambert -Beer定律( E = εc l) 上式说明了物质的吸光度与吸收物质的浓度和液层的厚度成正比,这就是光吸收的基本定律--Lambert-Beer(朗伯-比耳)定律.。

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